うずら13日胚由来細胞の培養＆継代
最近の実験のようすをお伝えします。
前回培養した細胞ですが、顕微鏡の都合上、ディッシュのかさ高さによりピントが上手く合わず…。
でも細胞がいる感じはします。
という訳で、薄い小さめのディッシュ(30mm)を使って、うずら細胞の培養をやり直すことにしました。
うずら13日胚より脚部分の組織片を採取し、1000μl PBSで懸濁、扇風機遠心を経て上清と沈殿物に分離したのち、上清部分200μlを加えた30mmディッシュを2枚作成しました。
一方のディッシュには3mlのDMEM(10%FBS)を、もう一方のディッシュには、DMEM(10%FBS)の6割をGREEN DA･KA･RAで置き換えたものを3ml加えました。
「えっ？」と思われる方かほとんどだと思われますが、培地成分であるDMEMの組成はスポーツドリンクに近く、先行実験により、スポーツドリンクの中でも特にGREEN DA･KA･RAが細胞の生育に適していることが分かっていました。ただし、当然完全に通常の培養液と成分が同じというわけではないため、通常の培養液の6割は代替できるというのが先行実験の結果でした。
このような背景から、今回の実験でもこの先行実験を踏襲し、上記の2種類の培地で培養を試みました。
また、沈殿物についてもピペッティングにより懸濁後、懸濁液200μlを加えた30mmディッシュを同じく2枚作成し、上記の2つの培養液をそれぞれ加えました。
(GREEN DA･KA･RA入りの培地は、比較的黄色になりました。)
37℃、カルチャーパル＆重曹水でCOでを発生させたインキュベーター内で培養を開始しました。
以下、3日目の様子です。
上清_DMEM(10%FBS)
上清_60%GREEN DA･KA･RA代替
懸濁液_DMEM(10%FBS)
懸濁液_60%GREEN DA･KA･RA代替
しっかり張りついていました！
60%GREEN DA･KA･RA代替の方は、気持ち細胞の数が少ないように思えました。
以下、培養6日目です。
上清_DMEM(10%FBS)
上清_60%GREEN DA･KA･RA代替
懸濁液_DMEM(10%FBS)
懸濁液_60%GREEN DA･KA･RA代替
6日目では、60%GREEN DA･KA･RA代替の方でもしっかり細胞が増えてました！
とりあえず、細胞がちゃんと張りついて増えていたので良かったです。
…今回は盛りだくさんになってしまったので、継代の詳細は、結果とともに後日お伝えします。
